分子生物學實驗理論與操作教程

目    錄
前   言-----------------------------------------------------------I
一部分   核酸提取----------------------------------------------1
實驗一：基因組DNA提取--------------------------------------------1
實驗二：總RNA提取------------------------------------------------3
二部分   亞克隆技術---------------------------------------------8
實驗三：質粒DNA提取----------------------------------------------8
實驗四：DNA片段的酶切--------------------------------------------9
實驗五：DNA片段的酶修飾-脫磷-------------------------------------12
實驗六：DNA片段的連接--------------------------------------------13
實驗七： DNA片段的回收-------------------------------------------15
三部分   PCR技術-----------------------------------------------18
實驗八：PCR產物的克隆技術----------------------------------------18
   八．1：T-載體構建 ---------------------------------------------19
   八．2：PCR產物的T-載體克隆------------------------------------20
   八．3：PCR產物的平端克隆技術----------------------------------21

實驗九：RT-PCR技術-----------------------------------------------21
實驗十：定量PCR -------------------------------------------------25
四部分   文庫構建技術------------------------------------------29
實驗十一：mRNA的提取及純化 --------------------------------------29
實驗十二：cDNA文庫構建技術- cDNA 鏈的反轉合成--------------------32

實驗十三：1,cDNA文庫構建技術- cDNA 鏈的連接、包裝及轉染----------34
實驗十三：2,RACE技術---------------------------------------------36
五部分  核酸雜交技術-------------------------------------------40
實驗十四：DNA探針的標記------------------------------------------40
實驗十五：Southern雜交技術---------------------------------------44
六部分：基因及基因產物檢測技術----------------------------------48
實驗十六：DNA的測序技術------------------------------------------48
實驗十七：基因表達 1，基因的體外快速翻譯-------------------------53
                   2，基因的誘導表達-----------------------------54
實驗十八：報告基因的應用------------------------------------------57
實驗十九：Western雜交技術----------------------------------------58
七部分  基因表達輪廓技術---------------------------------------67
實驗二十：DD-PCR技術---------------------------------------------73
實驗二一：SSH技術------------------------------------------------74
八部分：遺傳轉化技術-------------------------------------------75
實驗二二：感受態細胞制備-----------------------------------------75
實驗二三：重組基因的轉化及篩選------------------------------------77
實驗二四：原生質體分離--------------------------------------------78
實驗二五：農桿菌轉化技術------------------------------------------79
九部分：分子標記技術--------------------------------------------80
實驗二六：RFLP技術-----------------------------------------------86
實驗二七：RAPD技術-----------------------------------------------86
實驗二八：AFLP技術-----------------------------------------------87
實驗二九：SSR技術------------------------------------------------89
十部分：細胞技術-----------------------------------------------89
實驗三十：細胞凋亡------------------------------------------------89
十一：附錄  一----------------------------------------------------92
           二-----------------------------------------------------96