一、動物細胞原代和傳代培養

（一）培養液的配制

蒸餾水必須是新鮮的三蒸水。選用RPMI 1640培養液。

1.配1升RPMI1640培養液的粉末(1袋)+2gNaHCO3

2.溶于800mL三蒸水中充分攪勻

3.用HCl調節PH7.2-7.4

4.用蒸餾水補足1L

5.用滅菌濾器過濾（用φ0.45或0.20μm濾膜）

6.用滅菌瓶分裝（學生實驗）100ml/瓶

（二）磷酸鹽緩沖液(PBS)的配制

pH
 7.6
 7.4
 7.2
 7.0
 
H2O

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4
 1000

8.5

2.2

0.1
 1000

8.5

2.2

0.2
 1000

8.5

2.2

0.3
 100mL

8.5g

2.2g

0.4g
（三）7.4% (W/V)  NaHCO3

（四）10000 IU / ml硫酸鏈霉素、青霉素G鉀鹽的配制

硫酸鏈霉素             1g

青霉素G鉀鹽     100萬 國際單位（IU）

將上述兩種藥品溶于100mL生理鹽水中，然后滅菌（過0.45μm的濾膜），分裝于青霉素瓶中放－20℃保存。使用時可按100 IU／mL稀釋。

（五）0.05%胰蛋白酶溶液的配制

1.      1g胰蛋白酶加入20mLPBS中

2.      37℃攪拌2小時

3.      4℃7000rpm離心20min 

4.      取上清滅菌（過0.45μm的濾膜）

5.      每10mL分裝，放－20℃保存

6.      取10mL凍存的加入滅菌的PBS1L中，2％的EDTA(滅過菌的)10mL

7.      配成終濃度0.05％的胰蛋白酶

（六）0.3％臺盼蘭染液

      稱取臺盼蘭(Trypan blue)粉0.3克，溶于100mL生理鹽水中，加熱使之完全溶解，用濾紙過濾除渣，裝入瓶內室溫保存。

（七）洗液

方法：先將重鉻酸鉀完全溶解于水中,如不溶可加熱幫助溶解，然后緩慢加入濃硫酸。加濃硫酸時將產生大量熱量，因此配制的容器宜用陶瓷，加入濃硫酸時要緩慢而不能過急，以免熱量產生太多，導致容器破裂，發生危險。

次強液：重鉻酸鉀120g           強液： 重鉻酸鉀63g

               濃硫酸 200mL                    濃硫酸1000mL

               蒸餾水1000mL                   蒸餾水 200mL

二、脂類染色

10％中性福爾馬林      甲醛      100mL     磷酸二氫鈉    6.5g

                                           蒸餾水  900mL

蘇丹Ⅲ染液               蘇丹Ⅲ  0.1g       95%酒精       20mL

蘇丹黑染液               蘇丹黑  0.5g       70%酒精      100mL
 

三、石蠟切片

      卡諾氏固定液            100%酒精  3份     冰醋酸  1份

      埃利希蘇木精染液    蘇木精      1.0g       乙醇       50mL  

                                          醋酸          5mL       甘油       50mL

                                          硫酸鋁鉀  5g           蒸餾水   50mL

      將蘇木精溶于15mL的乙醇中，再加醋酸并攪拌，以加速其溶解。當蘇木精溶解后將甘油加入并搖動容器，同時加入其余的乙醇；硫酸鋁鉀需研磨并加熱，然后溶解于蒸餾水中，將其一滴滴地加入上邊的溶液，并不斷搖動，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風處，經常搖動以加速其成熟，成熟約需4周左右，成熟的染液為深紅色。

      1%伊紅酒精溶液      伊紅      1.0g      95%酒精    100mL

      1%鹽酸酒精溶液      鹽酸      1 份      70%酒精     100份

      郝普特氏粘片劑     明膠      1.0g      蒸餾水         100mL

                                          石炭酸   2.0g      甘油             15mL

      配制時明膠溶解于30℃的蒸餾水中(水浴鍋中進行),溶解后加入石炭酸和甘油,攪拌均勻過濾,貯存于玻璃瓶中.

1%番紅染液         番紅     1.0g       蒸餾水  100mL

1%固綠染液       固綠     1.0g       蒸餾水  100mL

四、PAS反應

      1%過碘酸                   過碘酸   1.0g        蒸餾水  100mL

      1 mol/L（V/V）HCl            濃鹽酸   8.5mL     蒸餾水  91.5mL

0.5%偏重亞硫酸鈉溶液   偏重亞硫酸鈉  0.5g  蒸餾水  100mL

      Schiff試劑          蒸餾水100mL煮沸后取下，立即放入堿性品紅1g使之溶解。冷卻至50℃時用濾紙過濾。加偏重亞硫酸納（或鉀）（或亞硫酸氫鹽）2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18～24h（室溫）。溶液變為草黃色。然后加入300mg活性炭，用力搖動1min，過濾。過濾后即得無色品紅。

     此液配就后，封嚴瓶塞，外包黑紙，貯于4℃冰箱備用，用前升至室溫。

五、核酸的細胞化學（Feulgen反應）

     1mol/LHCl          濃鹽酸   8.5mL     蒸餾水  91.5mL

      1％亮綠染液        亮綠       1g             蒸餾水  100mL

      Schiff試劑         蒸餾水100mL煮沸后取下，立即放入堿性品紅1g使之溶解。冷卻至50℃時用濾紙過濾。加偏重亞硫酸納（或鉀）（或亞硫酸氫鹽）2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18～24h（室溫）。溶液變為草黃色。然后加入300mg活性炭，用力搖動1min，過濾。過濾后即得無色品紅。

      此液配就后，封嚴瓶塞，外包黑紙，貯于4℃冰箱備用，用前升至室溫。
 

六、液泡系及線粒體的活體染色

Ringer溶液          氯化鈉             0.85g（變溫動物用0.65g）

                                氯化鉀             0.25g

                                 氯化鈣             0.03g

                                蒸餾水             100mL

1％的1/5000詹姆斯綠B溶液稱取50mg詹姆斯綠B溶于50mLRinger溶液混勻，稍加 熱（30～40℃）使之溶解，用濾紙過濾，即為1％原液。取1％原液1mL加入49mLRinger溶液，即成1/5000工作液。將其裝入瓶中備用 。建議現用現配 ，以保持  它的充分氧化能力。

1％的1/3000中性紅溶液    稱取0.5g中性紅溶液溶于50mLRinger液，稍加熱（30～40℃）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存。臨用前，取已配制的1％中性紅溶液1mL加入29mLRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。

七、細胞融合

Alsever溶液：       葡萄糖2.05g，檸檬酸鈉0.80g，NaCl 0.42g，

                                     溶于100mL雙蒸水中。

GKN溶液：           NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，

                                      NaH2PO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，

                                     溶于1000mL水中。

50％PEG溶液：    稱取一定量的PEG（WM＝4000）放入燒杯中，沸水浴加熱，使之熔化，待冷卻至50℃時，加入等體積預熱至50℃的GKN溶液，混勻，置37℃備用。