免疫組化試劑的選擇
 
 
一抗的正確選擇與使用
 
1. 首選單克隆抗體：單克隆抗體具有高特異性、高親和力、交叉反應少等特點，避免與細胞或組織蛋白的非特異性結合，減少染色背景。
 
2. 多克隆抗體：是經樣本來源種屬正常血清吸附過，盡可能的減少非特異性著色背景。加一抗，用封閉液（可以是BSA或二抗來源的正常動物血清）充分封閉，以阻斷非特異性結合位點。
 
3.
跨膜分子的抗體選擇：要注意免疫原是整個蛋白分子或是胞外區、胞內區。對于胞內區抗體，染色時需
要使用穿孔劑，而胞外區抗體不必使用。
 
4. 正確使用：一般供應商都會提供稀釋范圍和使用方法。
但由于供應商質撿所用組織不同，實驗條件和操作人為誤差，常常需要客戶自己再重新選擇比例。一般從供應商提供稀釋比例的1/10稀釋度始，作倍比稀釋。
 
5. 保存：一抗體一般為液體
 
二抗的正確選擇與使用
 
1. 種屬來源要匹配：根據所用一抗選定二抗。一般來說，如果一抗是小鼠原性，二抗應選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前，美國Vector公司和Zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒，即一抗來源于小鼠，該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內源性小鼠Ig的封閉液，可以得到清晰的染色背景。
 
2. 注意抗體同種型和亞型：確定一抗同種型和亞型后，可以選擇抗一抗來源種屬廣譜Ig或針對一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1, 可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。
 
3. 正確使用：也需要重新選擇稀釋比例。一般從供應商提供稀釋比例的1/10稀釋度始，作5倍比稀釋。
 
檢測系統的正確選擇

檢測系統一般有酶法、熒光法和親和放大系統：親和素－生物素放大系統很常用，但由于內源性親和素和生物素廣泛存在，經典的SP、SRABC和LSAB法等常出現背景著色，尤其是內源性生物素豐富的肝、腎染色時很難避免。Zymed公司研發的非生物素放大試劑盒NAB和Picture Plus試劑盒，采用多聚氨基酸支架偶聯多個抗體和酶、熒光素等信號檢測分子起到良好的放大效果，具有高敏、背景清晰等優點。
 
對于嚙齒動物組織的免疫化學檢測：由于嚙齒動物非特異性結合強，選用美國Vector公司和Zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒。設立陽性對照和陰性對照實驗設立對照是證明實驗系統正確性的標尺，為查找實驗原因提供重要線索。
 
1. 陽性對照的選擇：陽性對照是證明整個實驗體系正確的重要依據，主要涉及所用緩沖液、稀釋液、二抗和檢測系統等因素。尤其在結果出現無信號時，為查找原因的提供重要線索。具體選擇方法請參閱
抗原修復有關章節。
 
2. 陰性對照的選擇：有兩種：一種是自身對照，指測試組織本身非抗原表達部位。一種是外部對照，指已證實不表達檢測抗原的組織。設置陰性對照表明檢測抗原特異性和非抗原表達部位的非特異性結合。一般自身對照比較常用，在同一張測試片上作，減少了操作誤差，對照更可靠。
 
試劑保存
 
抗體試劑保存
：抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃�？贵w濃度越高（濃度大于10mg/ml），越穩定，易保存；濃度低時，應加
0.1%-1.5%的牛血清白蛋白作保護劑；必要時需要加0.01-0.15％NaN3防腐劑以延長保存時間。
 
酶標記抗體在應用防腐劑時要注意不能用NaN3，否則會抑制酶的活性。-抗體濃縮液應在-20℃保存，可以長達兩年；用時取出，室溫融解，如一次或短時間用不完，應進行小量分裝，－20℃保存，避免反復凍融；融解后抗體于2－8℃可以保存一個月。
（請參閱免疫組化基礎知識有關章節。）
  
試劑盒保存：完整試劑盒未打開前于2－8℃可以保存一年，打開后，應根據說明書要求對具體試劑進行適
當存放。一般標準品應放置－20℃，用不完的抗體試劑應小量分裝－20℃保存。

免疫組化常見問題分析及處理方法詳見第十二章。